细胞重金属毒性评价检测

检测项目

细胞存活评价：

• 细胞活力：MTT法测定存活率(参考值≥70%)
• 细胞增殖抑制率：CCK-8法计算IC50值(标准范围0.1-100μM)

氧化应激检测：

• 丙二醛含量：TBARS法测定(检测限0.1μmol/L，参照ISO19040)
• 超氧化物歧化酶活性：NBT还原法(单位U/mg蛋白)
• 谷胱甘肽含量：DTNB法测定(标准值5-10μmol/g蛋白)

DNA损伤分析：

• DNA断裂程度：彗星试验尾矩测定(评分0-4级)
• 8-羟基脱氧鸟苷含量：ELISA法检测(检测限0.1ng/mL)

细胞凋亡检测：

• 凋亡率：AnnexinV/PI双染色分析(参照GB/T16886.5)
• Caspase-3活性：荧光底物法测定(单位RFU/min)

线粒体功能评估：

• 膜电位变化：JC-1染色法(红绿荧光比≥1.5为正常)
• ATP含量：荧光素酶法测定(检测限0.01nmol/mg蛋白)

炎症因子测定：

• TNF-α释放量：ELISA法检测(标准范围0-50pg/mL)
• IL-6水平：免疫比浊法测定(参照ISO10993-5)

金属离子摄入量：

• 细胞内重金属浓度：原子吸收光谱法测定(检测限0.01ppm)
• 离子转运率：荧光探针法计算(单位nmol/min/10^6细胞)

细胞周期分析：

• G0/G1期比例：PI染色流式检测(标准分布30-50%)
• S期阻滞：BrdU掺入法测定(参照GB/T5009.74)

基因表达变化：

• 重金属响应基因：qRT-PCR法检测(如MT1A表达量)
• 氧化应激基因：荧光定量PCR分析(倍数变化≥2倍)

蛋白表达检测：

• 热休克蛋白70：WesternBlot法测定(灰度值分析)
• 金属硫蛋白含量：免疫荧光法检测(参照ISO19040)

检测范围

1.人源肝细胞系HepG2：用于评估肝脏特异性重金属毒性，重点检测谷丙转氨酶释放和细胞色素P450活性变化。

2.肾小管上皮细胞HK-2：侧重重金属诱导的肾毒性，包括N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶活性和肾损伤分子-1表达。

3.神经细胞系SH-SY5Y：针对神经毒性评价，重点检测乙酰胆碱酯酶活性和神经元特异性烯醇化酶水平。

4.肺上皮细胞A549：用于呼吸道重金属暴露研究，侧重检测乳酸脱氢酶释放和炎症因子IL-8。

5.间充质干细胞：评估重金属对干细胞分化的影响，重点检测碱性磷酸酶活性和成骨基因表达。

6.原代大鼠肝细胞：模拟体内毒性机制，侧重检测谷胱甘肽S-转移酶活性和胆汁酸分泌。

7.环境样本分离细胞：如鱼类细胞系RTgill-W1，用于生态毒理学，重点检测细胞膜通透性和重金属生物累积。

8.癌细胞系HeLa：应用于抗癌药物协同毒性研究，侧重检测细胞周期阻滞和凋亡信号通路。

9.巨噬细胞RAW264.7：针对免疫毒性评价，重点检测一氧化氮合成酶活性和吞噬功能。

10.昆虫细胞Sf9：用于高通量筛选，侧重检测细胞生长抑制率和金属离子耐受性。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验
• ISO19040-1:2018水质细胞毒性试验方法
• ISO10993-12:2021样品制备和参照材料
• ISO21427-1:2006水质彗星试验检测遗传毒性

国家标准：

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验
• GB/T5009.74-2003食品卫生微生物学检验细胞毒性试验
• GB/T27818-2011化学品体外细胞毒性试验方法
• GB/T39229-2020重金属污染土壤生物毒性检测方法

方法差异说明：国际标准ISO10993-5采用直接接触法，细胞暴露时间固定为24小时；而国家标准GB/T16886.5增加了间接接触法的详细参数，暴露时间可调至48小时。在彗星试验中，ISO21427-1要求使用中性条件，而GB/T27818允许碱性条件增强DNA损伤检测。

检测设备

1.倒置显微镜：NikonEclipseTi2(放大倍数40x-1000x，荧光通道3个)

2.流式细胞仪：BDFACSCantoII(激光波长488nm/640nm，检测通道8个)

3.酶标仪：ThermoScientificMultiskanSky(波长范围340-850nm，精度±1%)

4.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500(温度控制精度±0.1°C，通道数4)

5.凝胶成像系统：Bio-RadChemiDocMP(分辨率5百万像素，UV/白光光源)

6.超低温冰箱：ThermoScientificForma900(温度范围-86°C，容量700L)

7.高速离心机：EppendorfCentrifuge5424R(转速范围100-15000rpm，容量4x100mL)

8.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i(温度控制±0.2°C，CO2浓度5%)

9.生物安全柜：NuAireClassIIA2(风速0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%)

10.原子吸收光谱仪：PerkinElmerPinAAcle900T(检测限0.001ppm，波长范围190-900nm)

11.荧光显微镜：LeicaDMi8(LED光源，荧光滤片组DAPI/FITC/TRITC)

12.细胞计数器：CountessIIFL(计数精度±2%，容量0.1-100μL)

13.电泳仪：Bio-RadPowerPacBasic(电压范围10-300V，电流0.1-3A)

14.分光光度计：ShimadzuUV-1900i(波长范围190-1100nm，带宽1nm)

15.细胞培养摇床：INFORSHTMultitron(转速范围20-300rpm，温度范围4-50°C)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于细胞重金属毒性评价检测相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

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报告作用

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4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

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试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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