荧光PCR定量检测

检测项目

样本预处理评估：

• 核酸提取效率：回收率(≥95%)、完整性(OD260/280比值1.8-2.0，参照ISO20395)
• 样本基质干扰：抑制剂残留量(≤5%，参照GB/T27403)

PCR扩增性能：

• 扩增效率：斜率值(90%-110%)、循环阈值(CV<2%)
• 引物特异性：熔解曲线Tm值偏差(±0.5°C)
• 模板浓度验证：标准曲线R²值(≥0.99)

荧光检测参数：

• 信号灵敏度：背景荧光值(≤500RFU)、信噪比(≥10:1)
• 通道特异性：多色荧光串扰率(≤1%)

定量准确性评估：

• 绝对定量偏差：相对误差(±10%)、偏差值(≤±0.5log)
• 相对定量一致性：倍数变化误差(CV<15%)

特异性测试：

• 交叉反应性：非靶序列检出率(≤0.01%)
• 抗干扰能力：常见抑制剂耐受量(如血红素≤10μg/mL)

灵敏度分析：

• 检测限：LoD(1拷贝/μL，参照ISO17822)
• 定量限：LoQ(10拷贝/μL，CV<20%)

重复性和重现性：

• 批内变异：CV值(≤5%)
• 批间变异：CV值(≤10%)

稳定性验证：

• 试剂稳定性：储存期(≥12个月，活性损失≤10%)
• 样本稳定性：冻融循环次数(≤3次，降解率<5%)

数据分析验证：

• 曲线拟合：线性范围(R²≥0.98)、动态范围(100-10^9拷贝)
• 阈值设定：Ct值标准差(±0.3)

质量控制指标：

• 内参基因一致性：ΔCt值变异(CV<10%)
• 阴性对照检出率：假阳性率(≤0.1%)

检测范围

1.临床血液样本：适用于血清、血浆或全血，重点检测病原体核酸浓度变化(如病毒载量定量)。

2.组织活检样本：涵盖肿瘤或器官组织，侧重核酸提取完整性和定量准确性(如基因表达水平分析)。

3.环境水体样本：包括地表水或废水，重点检测微生物污染核酸(如细菌拷贝数监控)。

4.食品基质样本：适用于肉类或乳制品，侧重病原体核酸筛查(如食源性致病菌定量)。

5.植物组织样本：涵盖作物叶片或根部，重点检测转基因核酸水平(如外源基因拷贝数评估)。

6.细胞培养样本：包括培养液或细胞裂解物，侧重基因表达定量(如mRNA丰度测定)。

7.法医物证样本：适用于毛发或唾液，重点检测微量DNA浓度(如个体识别定量)。

8.空气悬浮颗粒样本：包括气溶胶收集物，侧重病原体核酸监测(如病毒气溶胶定量)。

9.土壤沉积物样本：涵盖农田或污染土壤，重点检测微生物核酸(如细菌群落定量)。

10.合成核酸标准品：适用于质控材料，侧重浓度验证和线性范围校准(如标准曲线构建)。

检测方法

国际标准：

• ISO20395:2019生物技术-核酸定量检测方法-实时荧光PCR
• ISO17822:2020体外诊断-分子检测性能评估

国家标准：

• GB/T27403-2008实验室质量控制规范-分子生物学检测
• GB/T37876-2019核酸检测试剂盒性能评价方法

国际标准强调多实验室验证和全球一致性，国标则注重本地化参数要求(如ISO指定检测限计算法，GB/T增加样本预处理规范差异)。

检测设备

1.实时荧光PCR仪：QuantStudio5型(温度精度±0.1°C，检测通道6个)

2.核酸提取工作站：KingFisherFlex型(通量96样本/批次，回收率≥98%)

3.超微量分光光度计：NanoDropOne型(检测范围2-15000ng/μL，精度±1%)

4.恒温混匀仪：ThermomixerC型(温度范围4-99°C，震荡速度300-1500rpm)

5.冷冻离心机：Centrifuge5424R型(最大转速15000rpm，温度控制-10°C至40°C)

6.生物安全柜：ClassIIA2型(风速0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%)

7.微量移液器：ResearchPlus型(量程0.1-1000μL，精度±0.5%)

8.PCR板封膜机：Microseal'F'型(密封压力300N，兼容96孔板)

9.荧光信号分析软件：SDS3.0版(数据分析算法支持ΔΔCt法，误差率<0.5%)

10.恒温水浴锅：WB-10型(温度精度±0.2°C，容量10L)

11.振荡器：VortexGenie2型(转速范围500-3200rpm，稳定性CV<1%)

12.高精度天平：Sartorius0.001g型(量程0-200g，灵敏度0.1mg)

13.低温存储箱：-80°C超低温冰箱(温度稳定性±3°C，容量700L)

14.自动分液系统：Biomeki5型(分液精度±1%，通量384孔/小时)

15.数据记录仪：HOBOUX120型(采样率1次/秒，存储容量128MB)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于荧光PCR定量检测相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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