诺如病毒RT-PCR分析

检测项目

样本预处理：

• 样本均质化：颗粒大小≤100μm(参照ISO6887标准)
• pH调节：目标pH7.0-7.5(参照CLSIM40-A2)
• 内标添加：RNaseP浓度≥5copies/μL

核酸提取：

• RNA回收率：≥90%(参照QiagenRNeasy手册)
• 纯度检测：A260/A280比值1.8-2.0(参照NanoDrop规范)
• 浓度要求：≥50ng/μL(参照MIQE指南)

逆转录反应：

• cDNA合成效率：≥95%(参照ThermoFisher手册)
• 酶活性控制：逆转录酶单位≥200U/μL(参照ISO20395标准)
• 模板完整性：RNA完整性数≥7.0

PCR扩增：

• 循环参数：变性94℃/30s，退火55℃/30s(参照CDC协议)
• 扩增效率：90%-110%(参照MIQE指南)
• 产物特异性：熔解曲线Tm值±0.5℃(参照ISO17822)

定量分析：

• 拷贝数计算：标准曲线R²≥0.99(参照CLSIEP17-A2)
• 检测限：10拷贝/μL(参照FDA指南)
• 定量限：50拷贝/μL(参照ISO20395)

质量控制：

• 阴性对照：Ct值≥40(参照MIQE指南)
• 阳性对照：Ct值≤35(参照CDC标准)
• 重复性：CV≤5%(参照CLSIEP05-A3)

特异性测试：

• 交叉反应：无扩增同源病毒(如轮状病毒)
• 引物特异性：BLAST验证相似性<85%(参照NCBI标准)
• 探针淬灭：FAM/BHQ1淬灭效率≥98%

灵敏度测试：

• 稀释系列：log10稀释线性(R²≥0.98)
• 最低检出：5拷贝/反应(参照ISO15216)
• 变异系数：≤10%(参照CLSIEP06-A)

基因分型：

• GI/GII区分：熔解峰差值≥2℃(参照WHO指南)
• 突变检测：SNP分辨率≥95%(参照Illumina规范)
• 序列覆盖度：≥98%(参照ISO20395)

数据验证：

• 扩增曲线分析：阈值循环Ct值精确度±0.5(参照MIQE指南)
• 结果确认：Sanger测序一致性≥99%(参照CLSIMM18-A)
• 报告出具：符合ISO/IEC17025规范

检测范围

1.人类临床样本：涵盖粪便、呕吐物，重点检测诺如病毒载量及基因型分布

2.食品样本：贝类(如牡蛎)、生鲜果蔬，侧重表面残留病毒RNA提取效率

3.水源与环境样本：饮用水、污水，关注低浓度病毒浓缩回收率

4.表面拭子：医疗设施、厨具表面，重点采集均匀性及抑制物去除

5.动物源性样本：猪、牛粪便，检测人畜共患传播风险

6.加工食品：冷冻海鲜、即食餐点，着重热稳定性病毒检出

7.生物安全样本：实验室培养物，确保无污染扩增

8.空气样本：气溶胶过滤器，侧重病毒颗粒捕获效率

9.药品与试剂：疫苗原料、缓冲液，验证无菌条件下RNA稳定性

10.废弃物样本：生物医疗废物，检测病毒灭活效果

检测方法

国际标准：

• ISO15216-1:2017食品中诺如病毒分子检测
• AOAC2013.09贝类病毒RT-PCR验证
• ISO20395:2018分子诊断系统性能评估

国家标准：

• GB/T34795-2017病毒核酸提取通用要求
• GB/T38502-2020病原微生物PCR检测规范
• WS/T683-2020临床样本诺如病毒检测指南

(方法差异说明：国际标准ISO15216强调食品基质处理，而国家标准GB/T34795侧重临床样本兼容性；AOAC标准允许TaqMan探针，GB标准推荐SYBRGreen替代方案)

检测设备

1.核酸提取仪：KingFisherFlex(通量96样本/次，磁珠回收率≥95%)

2.实时PCR系统：QuantStudio7Pro(温度精度±0.1℃，通道数6)

3.超微量分光光度计：NanoDropOne(检测范围2-15000ng/μL，分辨率0.1ng/μL)

4.离心机：Eppendorf5425R(转速15000rpm，控温精度±1℃)

5.涡旋混合器：Vortex-Genie2(转速100-3000rpm，定时精度±1s)

6.恒温孵育器：ThermomixerC(温控范围4-100℃，震荡频率300-1500rpm)

7.电泳系统：Bio-RadMini-PROTEAN(电压范围50-300V，凝胶分辨率≤100bp)

8.冷冻离心机：BeckmanCoulterAllegraX-15R(温度-10至40℃，容量6×50mL)

9.自动移液器：EppendorfResearchPlus(精度±0.5%，量程0.1-1000μL)

10.生物安全柜：ESCOClassII(气流速度0.5m/s，过滤器效率99.99%)

11.样本均质器：BertinPrecellys24(振荡频率5000-10000rpm，适配器容量24×2mL)

12.低温存储箱：ThermoScientificTSX(温度-86℃，容量700L)

13.紫外分光仪：AgilentCary60(波长范围190-1100nm，带宽1nm)

14.PCR板封膜机：Bio-RadPX1(密封温度150-200℃，速度5s/板)

15.数据采集软件：AppliedBiosystemsDesignSuite(兼容性：多平台数据导出)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于诺如病毒RT-PCR分析相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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