胆固醇酯化酶活性荧光法准确性验证研究

检测项目

酶活性参数：

• 活性测定：活性值(U/mL)、荧光强度变化率(ΔRFU/min)(参照ISO15193)
• 线性范围：检测下限(0.1U/mL)、上限(100U/mL)

特异性验证：

• 交叉反应性：非特异性酶干扰(≤5%)
• 底物特异性：仅对胆固醇酯底物(反应效率≥95%)

精度测试：

• 批内精度：相对标准偏差(RSD≤10%)
• 批间精度：变异系数(CV≤15%)

回收率试验：

• 添加回收率：目标回收率(90%-110%)
• 基质回收率：血清样本(回收率≥85%)

灵敏度评估：

• 检测限：LOD(≤0.05U/mL)
• 定量限：LOQ(≤0.1U/mL)

稳定性测试：

• 试剂稳定性：储存时间(4℃下≥30天)
• 样本稳定性：室温下活性损失(≤10%)

干扰因素评估：

• 溶血干扰：血红蛋白浓度(≤5g/L)
• 脂血干扰：甘油三酯水平(≤500mg/dL)

温度影响：

• 反应温度：最佳温度(37±1℃)
• 温度偏差：活性变化(≤5%)

方法比较：

• 参比方法：比色法(相关系数r≥0.98)
• 偏差分析：平均偏差(≤±5%)

可重复性验证：

• 重复检测次数：三次重复(RSD≤8%)
• 操作员变异：不同操作员偏差(≤±7%)

检测范围

1.血清样本：涵盖健康人及高脂血症患者血清，重点检测基质效应和溶血干扰影响下的酶活性准确性

2.血浆样本：包括肝素或EDTA抗凝血浆，侧重评估抗凝剂对荧光信号稳定性的影响

3.细胞裂解液：来源于肝细胞或巨噬细胞，重点检测细胞内酶活性及细胞碎片干扰

4.组织匀浆：肝组织或动脉粥样硬化斑块组织，侧重组织基质复杂性和匀浆均匀度验证

5.培养上清液：细胞培养介质，重点检测培养基成分对荧光背景的干扰

6.冻干粉样本：酶标准品冻干粉，侧重复溶后活性稳定性和浓度线性

7.质控品：商业质控血清，重点验证批次间一致性和方法可转移性

8.临床诊断样本：心血管疾病患者样本，侧重病理状态下酶活性变化的检测精度

9.缓冲液体系：PBS或Tris缓冲液，重点评估pH值波动对反应速率的影响

10.酶反应混合物：含底物和辅因子的混合液，侧重反应动力学参数和终点检测优化

检测方法

国际标准：

• ISO15193:2020体外诊断测试系统性能评估
• CLSIEP05-A3精密度和准确性评估指南
• CLSIEP17-A2检测限和定量限测定

国家标准：

• GB/T29791-2013体外诊断试剂性能评估
• GB/T21415-2008临床实验室检测方法验证
• GB/T16886-2011医疗器械生物学评价

(方法差异说明：ISO标准要求回收率试验采用加标样本，而GB标准强调基质匹配样本；CLSIEP05-A3规定批内精度测试重复10次，GB/T29791-2013要求重复5次；CLSIEP17-A2使用多浓度梯度计算LOD/LOQ，GB标准采用信噪比法)

检测设备

1.荧光分光光度计：RF-6000型(波长范围200-900nm，分辨率≤1nm)

2.酶标仪：SynergyH1型(检测模式：荧光，波长激发/发射485/528nm)

3.恒温孵育器：HWS-150型(温度范围20-60℃，精度±0.5℃)

4.离心机：TGL-20M型(转速范围0-20000rpm，最大离心力25000×g)

5.微量移液器：ResearchPlus型(量程0.1-1000μL，精度±1%)

6.pH计：PB-10型(测量范围0-14，精度±0.01pH)

7.分光光度计：UV-1800型(波长范围190-1100nm，带宽2nm)

8.恒温水浴：DK-8D型(温度控制精度±0.1℃，容量5L)

9.振荡器：TS-1型(振荡频率0-300rpm，振幅5mm)

10.低温冰箱：DW-86L388型(温度范围-40℃至-86℃，稳定性±2℃)

11.电子天平：ME204E型(量程0-220g，精度0.0001g)

12.超纯水系统：Milli-Q型(产水电阻率≥18.2MΩ·cm)

13.数据采集系统：LabSolutions型(数据采样率10Hz，兼容性RS232接口)

14.样品混合器：VM-10型(混合速度0-3000rpm，时间控制0-60min)

15.比色皿：Quartz型(光程10mm，材质熔融石英)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

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2、我院对已出过的报告负责。

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4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

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试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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