病毒载量定量检测方法测定

检测项目

核酸提取性能：

• 提取效率：回收率≥95%(参照ISO22174)，残留抑制剂浓度≤0.5ng/μL
• 纯度评估：A260/A280比值1.8-2.0，A260/A230比值≥2.0
• 完整性检测：RNA完整性数(RIN)≥7.0(参照DV200标准)

PCR扩增特性：

• 扩增效率：斜率-3.3±0.1，R²≥0.98(参照MIQE指南)
• 循环阈值(Ct值)：变异系数CV≤10%，动态范围10^1-10^8copies/reaction
• 非特异性扩增：熔解曲线单一峰，杂峰高度≤5%

定量准确性：

• 绝对定量偏差：标准曲线斜率误差±0.05，截距≤0.2log
• 相对定量误差：∆∆Ct法偏差±0.3cycles(参照CLSIEP05)
• 加标回收率：95%-105%，基质匹配偏差≤10%

检测灵敏度：

• 检测限(LOD)：≤20copies/mL(95%置信区间)，参照WHO病毒载量指南
• 定量限(LOQ)：≥50copies/mL(CV≤20%)，线性下限确认
• 低丰度样本检出率：≥95%at100copies/mL

分析特异性：

• 交叉反应性：非目标病毒(如EJianCe,CMV)干扰≤1%，参照ISO15189
• 内源性干扰：人基因组DNA影响≤0.1%，抑制剂耐受度≥10mg/mL
• 引物探针特异性：BLAST验证无同源匹配，假阳性率≤0.1%

重复性验证：

• 批内精密度：CV≤5%(n=10重复)，参照CLSIEP15
• 批间精密度：CV≤10%(n=5批次)，时间稳定性测试
• 操作者变异：CV≤8%(多操作者验证)

稳定性测试：

• 样本冻融稳定性：≤3次循环Ct值漂移±1.0(参照ICHQ1A)
• 长期储存稳定性：-80°C条件下Ct值变化≤0.5log/year
• 试剂稳定性：有效期≥12个月，活性损失≤10%

线性范围评估：

• 动态范围：10^2-10^9copies/mL，线性相关系数R≥0.99
• 稀释线性：连续稀释偏差±10%，斜率验证-3.3±0.2
• 高值钩状效应：检测上限确认，无信号抑制

精确度测量：

• 日内精密度：SD≤0.2log(n=20)，参照ISO5725
• 日间精密度：SD≤0.3log(n=30)，温度波动影响测试
• 方法比对偏差：与其他平台差异≤0.4log(如qPCRvsdPCR)

交叉污染控制：

• 阳性对照隔离：独立工作区，气溶胶污染率≤0.01%
• 阴性对照检出：假阳性事件≤1/1000测试，UV消毒验证
• 环境监测：表面擦拭样本病毒残留≤10copies/cm²

检测范围

1.全血样本：重点检测病毒RNA提取效率及抗凝剂抑制剂影响，确保EDTA或肝素处理样本的定量准确性。

2.血浆/血清样本：侧重病毒载量稳定性及纤维蛋白干扰消除，适用于HIV/HCV定量。

3.唾液/口腔拭子样本：检测黏膜病毒载量，关注核酸降解防护及粘液抑制剂去除。

4.组织活检样本：针对实体瘤或感染组织，重点评估匀浆处理均一性及宿主DNA背景抑制。

5.尿液样本：适用于泌尿系统病毒，检测尿素/盐浓度干扰及低丰度病毒浓缩效果。

6.粪便样本：侧重肠道病毒定量，处理复杂基质如胆盐/细菌影响。

7.细胞培养上清：用于病毒增殖研究，检测培养基成分干扰及细胞碎片清除。

8.环境拭子样本：表面病毒监测，重点评估采样回收率及环境抑制剂耐受。

9.疫苗产品：灭活病毒载量验证，确保无活性病毒残留及佐剂兼容性。

10.诊断试剂盒：预封装试剂性能评估，包括引物探针稳定性及批间一致性。

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室要求(涵盖病毒载量验证协议)
• WHO/BS/2021.1病毒载量测定指南(规范qPCR校准品等级)
• CLSIEP17-A2检测限评估协议(LOD计算模型差异)
• MIQE准则(qPCR实验设计及报告标准)

国家标准：

• GB/T37871-2019病毒核酸检测通用要求(定量方法验证框架)
• YY/T1258-2023体外诊断试剂稳定性评价(储存条件差异)
• 中国药典2020版三部(生物制品病毒安全性检测)
• GB/T27401-2008实验室质量控制规范(精密度测试方法)

(方法差异说明：国际标准如ISO15189强调实验室体系，而国家标准GB/T37871更聚焦试剂性能；WHO指南要求LOD验证采用Probit分析，而GB/T37871允许稀释法；CLSIEP17定义定量限基于CV，YY/T1258附加温度加速测试)

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：QuantStudio7Pro(检测通道：6色，温控精度±0.1°C)

2.数字PCR系统：QX200DropletDigitalPCR(分区数：20,000滴/样本，绝对定量误差±5%)

3.核酸提取工作站：KingFisherFlex(通量：96样本/run，回收率≥98%)

4.超微量分光光度计：NanoDropOne(检测限：2ng/μL，波长范围190-850nm)

5.高速离心机：Eppendorf5430R(转速：30,000rpm，温度控制±1°C)

6.生物安全柜：EscoA2型(气流流速：0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%)

7.超低温冰箱：ThermoScientific-80°CJianCeT(温度稳定性±2°C，容量700L)

8.微孔板离心机：BeckmanCoulterAllegraX-15R(转速：4,000rpm，适配96孔板)

9.自动化液体处理系统：HamiltonSTARlet(移液精度CV≤1%，通量384孔)

10.凝胶成像系统：Bio-RadChemiDoc(分辨率：5百万像素，灵敏度0.1pgDNA)

11.恒温混匀仪：EppendorfThermoMixer(温度范围4-99°C，震荡频率300-1,400rpm)

12.电泳仪：Bio-RadPowerPac(电压范围10-300V，电流1-400mA)

13.UV消毒设备：UVPCrosslinker(波长254nm，照射剂量100-999mJ/cm²)

14.生物分析仪：Agilent2100(核酸完整性检测，DV200≥80%)

15.真空浓缩仪：EppendorfConcentratorPlus(蒸发速率1mL/hr，温度控制±0.5°C)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于病毒载量定量检测方法测定相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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