心脏灌流心肌细胞蛋白组学检测

检测项目

全蛋白组定性分析：

• 蛋白鉴定数量：≥1000种(基于LC-MS/MS分析)
• 肽段匹配率：≥95%(参照ISO23036-1)
• 序列覆盖率：≥30%(单蛋白平均覆盖度)

差异蛋白定量分析：

• 差异表达倍数：≥1.5倍(上调)、≤0.67倍(下调)
• 统计显著性：P值≤0.05(t检验)、假阳性率(FDR)≤0.01(Benjamini-Hochberg校正)
• 动态范围：≥10^4(低丰度至高丰度蛋白覆盖)

翻译后修饰分析：

• 磷酸化修饰：丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)位点鉴定(≥500个位点)
• 乙酰化修饰：赖氨酸(Lys)位点占有率≥5%(基于iTRAQ标记)
• 泛素化修饰：ubiquitin链类型(K48、K63连接)分析

蛋白相互作用分析：

• 相互作用对数量：≥500对(基于Co-IP-MS)
• 核心调控蛋白网络：度中心性≥10(Cytoscape分析)
• 共表达相关性：Pearson系数≥0.8(蛋白表达量关联)

亚细胞定位分析：

• 细胞质蛋白比例：±5%(通过差速离心分离)
• 线粒体蛋白富集度：≥2倍(相对于总蛋白)
• 细胞核蛋白纯度：≥90%(Westernblot验证)

代谢通路富集分析：

• 通路富集分数：NES≥1.5(GSEA分析)
• 差异蛋白涉及通路数量：≥10条(如PI3K-Akt、MAPK通路)
• 关键节点蛋白：折叠变化(FC)≥2倍(通路核心分子)

低丰度蛋白检测：

• 低丰度蛋白鉴定数量：≥200种(如细胞因子、信号分子)
• 检测下限：≤10fmol(质谱信噪比≥10:1)
• 回收率：≥85%(spiked-in标准蛋白)

蛋白降解途径分析：

• 蛋白酶体降解靶点：≥50种(基于MG132抑制实验)
• 自噬相关蛋白表达：LC3-II/LC3-I比值≥2(Westernblot)
• 泛素化蛋白半衰期：≤24h(cycloheximidechase实验)

心肌特异性蛋白验证：

• 肌钙蛋白I(cTnI)：表达量≥1000ng/mg蛋白(ELISA定量)
• 肌球蛋白重链(MYH7)：异构体比例±3%(qPCR验证)
• 结蛋白(Desmin)：纤维完整性≥90%(共聚焦显微镜观察)

药物干预后蛋白响应分析：

• 药物靶点结合率：≥80%(基于Pull-down实验)
• 下游效应蛋白变化：≥1.8倍(如AKT磷酸化水平)
• 脱靶效应蛋白数量：≤10种(差异蛋白筛选)

检测范围

1.正常对照心肌细胞：来自健康成年动物或供体的离体灌流心脏，重点检测基础蛋白表达谱及翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化)基线水平

2.缺血再灌注损伤心肌细胞：模拟心梗后再灌注模型(缺血30min+再灌注2h)，侧重氧化应激相关蛋白(如SOD、GPx)及凋亡蛋白(如Bax/Bcl-2比值)变化

3.心力衰竭模型心肌细胞：压力超负荷诱导的心室重构模型(主动脉缩窄术)，重点分析肌小节蛋白(如cTnT、MYH6)及细胞外基质蛋白(如collagenI/III比值)表达

4.药物处理心肌细胞：β受体阻滞剂(如美托洛尔)、ACEI类药物(如依那普利)干预后，检测靶点蛋白(如β1-AR、ACE)及下游信号通路(如cAMP-PKA)蛋白变化

5.基因编辑心肌细胞：CRISPR/Cas9修饰的突变体(如MYH7R403Q突变)，重点验证突变蛋白的表达量、折叠状态及与伴侣蛋白(如HSP70)的相互作用

6.糖尿病心肌病心肌细胞：高糖(30mMglucose)诱导的代谢紊乱模型，侧重糖代谢相关蛋白(如GLUT4)及脂毒性蛋白(如FFA合成酶)分析

7.病毒性心肌炎心肌细胞：柯萨奇病毒B3(CVB3)感染模型，重点检测病毒受体蛋白(如CAR)及免疫炎症相关蛋白(如IL-6、TNF-α)表达

8.老龄化心肌细胞：老年动物(18-24个月龄)离体心脏，侧重衰老相关蛋白(如p53、SIRT1)及端粒酶活性相关蛋白(如TERT)的表达变化

9.心肌梗死边缘区细胞：心梗后存活心肌组织(梗死周边1cm区域)，重点分析修复相关蛋白(如VEGF、TGF-β)及血管生成因子(如ANGPT1)的表达

10.干细胞来源心肌细胞：iPSC诱导分化的心肌细胞(成熟度≥80%)，侧重心肌特异性蛋白(如cTnT、α-MHC)的鉴定及电生理相关蛋白(如Nav1.5)的表达

检测方法

国际标准：

• ISO23036-1:2021蛋白质组学-液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析总则
• ASTME3294-21差异蛋白质组学定量分析指南(同位素标记法)
• ICHQ6B生物制品中蛋白质鉴定与纯度分析

国家标准：

• GB/T37840-2019蛋白质组学研究质谱分析数据处理规范
• GB/T38485-2020差异蛋白质组学定量方法同位素标记法
• YY/T1858-2022生物样本中蛋白质表达谱分析液相色谱-串联质谱法

方法差异说明：ISO23036-1侧重质谱数据的重复性(RSD≤10%)与准确性要求，而GB/T37840更强调数据处理的标准化流程(如肽段匹配算法、FDR校正)；ASTME3294推荐的TMT标记法定量精度(±5%)高于GB/T38485中的标记-free法(±10%)；ICHQ6B针对生物制品的蛋白鉴定要求肽段覆盖率≥40%，高于普通样本的30%要求(ISO23036-1)。

检测设备

1.液相色谱-质谱联用仪：ThermoScientificOrbitrapFusionLumos(分辨率≥500,000FWHM，扫描速度≥20Hz，质量精度≤1ppm)

2.高分辨质谱仪：BrukertimsTOFPro(离子迁移率分辨率≥100，动态范围≥10^5，检测限≤5fmol)

3.纳升液相色谱系统：EksigentekspertnanoLC425(流速范围50-1000nL/min，柱温稳定性±0.1℃，分离度≥1.8)

4.蛋白质分离系统：Agilent1290InfinityII(压力≥1200bar，峰宽≤10sec，流速精度±0.1%)

5.同位素标记定量系统：ABSciexTripleTOF6600(标记效率≥98%，扫描速度≥100spectra/sec，线性范围≥10^4)

6.蛋白免疫印迹系统：Bio-RadChemiDocMP(检测限≤1pg，线性范围≥5个数量级，曝光时间精度±0.1sec)

7.流式细胞仪：BDFACSAriaIII(荧光通道≥18，分选速度≥10,000cells/sec，分选纯度≥99%)

8.共聚焦显微镜：LeicaTCSSP8(分辨率≤150nm，扫描速度≥8fps，荧光灵敏度≥1photon/sec)

9.生物分子相互作用仪：GEBiacoreT200(亲和力检测范围10^-6-10^-12M，流速范围1-100μL/min，响应时间≤1sec)

10.低温超速离心机：BeckmanCoulterOptimaXE-90(转速≥90,000rpm，离心力≥500,000xg，温度稳定性±0.5℃)

11.超高压液相色谱仪：WatersACQUITYUPLCH-Class(压力≥15,000psi，分离度≥1.5，柱温范围4-80℃)

12.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪：BrukerautoflexmaX(质量范围500-1,000,000Da，分辨率≥20,000，检测限≤1pmol)

13.蛋白质定量分析仪：ThermoScientificQubit4(检测范围1-500μg/mL，精度±5%，检测时间≤5min)

14.生物样本均质器：BulletBlenderStorm(均质效率≥95%，样本温度≤4℃，处理量≥24个样本/批)

15.蛋白结晶仪：RigakuCrystalMation(滴液体积精度±0.1nL，温度范围4-40℃，湿度控制≥95%)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于心脏灌流心肌细胞蛋白组学检测相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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