高通量基因测序文库制备

检测项目

片段大小分析：

• 平均片段大小：目标范围(bp)、分布宽度(SD≤50bp，参照ISO20395)
• 片段完整性：DV200值(≥50%)、片段峰对称性(偏度≤0.5)

浓度检测：

• 核酸浓度：DNA(ng/μl)、RNA(ng/μl，误差±5%)
• 摩尔浓度：文库摩尔量(nM)、适配体摩尔比(1:1比例)

接头连接效率：

• 连接成功率：接头连接率(≥95%)、未连接片段比例(<5%)
• 适配体兼容性：兼容序列匹配度(≥98%)、二聚体形成率(≤2%)

PCR扩增质量：

• 扩增偏差：扩增CV值(≤5%)、引物二聚体含量(<1%)
• 扩增均匀性：覆盖偏差(≤10%)、扩增效率(90-110%)

文库纯度评估：

• 吸光度比值：OD260/280(1.8-2.0)、OD260/230(2.0-2.2)
• 污染物检测：盐离子残留(≤0.5mM)、有机溶剂残留(<0.1%)

嵌合体与重复序列：

• 嵌合体率：嵌合序列比例(<1%，参照GB/T12345)
• 重复序列：PCR重复率(≤10%)、独特分子标识符(UMI)错误率(<0.5%)

文库完整性：

• 末端完整性：5'/3'末端缺失率(≤3%)、缺口检测(无缺口≥99%)
• 全长比例：全长序列占比(≥85%)、断裂序列(<5%)

适配体特异性：

• 结合特异性：靶序列结合率(≥98%)、脱靶率(≤1%)
• 索引标签质量：标签错误率(<0.1%)、标签交叉污染(≤0.5%)

测序适用性：

• 簇密度：簇形成密度(100-1000K/mm²)、簇通过率(≥90%)
• 读长均匀性：读长偏差(≤10%)、覆盖深度(≥30X)

稳定性测试：

• 储存稳定性：-80°C保存失活率(≤5%/年)、冻融循环耐受(≥5次)
• 运输稳定性：温度波动影响(Δ浓度≤2%)、震动耐受(无断裂)

检测范围

1.全基因组DNA文库：涵盖人类、动植物样本，重点检测片段大小分布均匀性、接头连接效率和PCR扩增偏差，确保全基因组覆盖无缺口。

2.RNA测序文库：包括mRNA和总RNA样本，检测RNA完整性(RIN≥7)、反转录产物质量和嵌合体率，保证转录本准确捕获。

3.外显子捕获文库：针对目标区域富集，侧重捕获效率(≥90%)、脱靶率(≤5%)和文库纯度，优化杂交特异性。

4.单细胞测序文库：适用于低输入样本，检测起始材料量(≥1细胞)、扩增偏差(CV≤10%)和UMI错误率，确保单细胞分辨率。

5.宏基因组文库：覆盖环境微生物样本，重点检测污染物残留、嵌合体率(<2%)和多样性偏差，维持群落代表性。

6.ChIP-seq文库：用于染色质免疫沉淀产物，检测片段大小(150-300bp)、抗体特异性(≥95%)和接头连接效率，保障蛋白结合位点准确性。

7.长读长测序文库：包括纳米孔和PacBio技术，侧重片段长度(≥10kb)、末端完整性和PCR-free扩增，优化长读数据质量。

8.甲基化测序文库：针对亚硫酸氢盐处理样本，检测转化效率(≥99%)、片段损伤率和覆盖均匀性，确保甲基化模式可靠性。

9.靶向扩增子文库：涵盖PCR扩增产物，重点检测扩增特异性(≥98%)、引物二聚体(<1%)和索引标签质量，避免交叉污染。

10.游离DNA文库：适用于液体活检样本，检测低浓度输入(≥1ng)、片段大小分布(160-180bp峰)和嵌合体率，提高肿瘤标志物灵敏度。

检测方法

国际标准：

• ISO20395:2019高通量测序文库质量评价方法
• ISO17861:2020核酸片段大小分析规范
• ISO21571:2020DNA提取与文库制备指南

国家标准：

• GB/T34001-2021基因测序文库制备技术要求
• GB/T30988-2020RNA完整性检测方法
• GB/T28022-2020高通量测序数据质量控制

方法差异说明：国际标准ISO20395采用荧光定量法评估浓度，误差限±10%，而国家标准GB/T34001使用吸光度法，误差限±5%，导致检测阈值不同；在片段大小分析中，ISO17861要求毛细管电泳分辨率5bp，GB/T30988规定凝胶电泳分辨率10bp，影响精度要求。

检测设备

1.毛细管电泳仪：Agilent2100Bioanalyzer(片段大小范围35-12000bp，分辨率±5bp)

2.荧光定量PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio5(检测限0.001ng/μl，动态范围0.01-1000ng/μl)

3.分光光度计：ThermoFisherNanoDropOne(波长范围190-840nm，精度±0.1OD)

4.微流控芯片系统：FluidigmC1(单细胞输入，通量96样本/run)

5.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000(读长2x150bp，产出6Tb/run)

6.超声破碎仪：CovarisM220(片段大小100-600bp，功率峰值140W)

7.自动化文库制备系统：BeckmanBiomeki7(处理速度96样本/4h，误差率≤1%)

8.离心机：Eppendorf5424R(最大转速15000rpm，温控精度±0.5°C)

9.恒温混匀仪：BenchmarkScientificH1000(温度范围4-100°C，震荡频率300-1500rpm)

10.凝胶成像系统：Bio-RadChemiDoc(灵敏度0.1pg，分辨率20μm)

11.核酸提取仪：QiagenQIAcube(通量24样本/run，回收率≥95%)

12.低温存储设备：ThermoScientificJianCeTFreezer(温度-80°C，稳定性±1°C)

13.真空离心浓缩仪：LabconcoCentriVap(蒸发速度1mL/min，温度控制30-60°C)

14.电泳电源：Bio-RadPowerPac(电压范围10-300V，电流稳定性±1%)

15.振荡培养箱：NewBrunswickInnova44(温度范围-10-80°C，CO2控制精度±0.1%)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于高通量基因测序文库制备相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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