心脏灌流心肌细胞NAD+/NADH比率检测

检测项目

氧化还原状态检测：

• NAD+浓度：检测限≤0.1μmol/L、线性范围0.5-100μmol/L(参照生物化学标准)
• NADH浓度：检测限≤0.1μmol/L、线性范围0.5-100μmol/L(参照生物化学标准)
• NAD+/NADH比率：计算精度±0.05、标准值范围0.5-10.0

代谢参数分析：

• ATP水平：检测限≤0.05mmol/L、回收率≥95%
• 乳酸浓度：检测限≤0.1mmol/L、线性范围0.2-20mmol/L
• 糖酵解速率：单位μmol/min/mg蛋白、变异系数≤5%

细胞活力评估：

• 细胞存活率：MTT法吸光度值(OD570≥0.5)、活细胞计数≥90%
• 凋亡指数：AnnexinV阳性率≤10%、Caspase-3活性≤5U/mg蛋白
• 坏死率：LDH释放量≤5%、参照细胞毒性标准

酶活性检测：

• NAD激酶活性：单位U/mg蛋白、Km值≤10μmol/L
• SIRT1脱乙酰酶活性：单位mU/mg蛋白、底物特异性≥98%
• 乳酸脱氢酶活性：单位U/L、线性范围1-100U/L

氧化应激指标：

• ROS水平：检测限≤50RFU、线性范围100-10000RFU
• SOD活性：单位U/mg蛋白、回收率≥90%
• GSH浓度：检测限≤0.1μmol/L、线性范围0.5-50μmol/L

线粒体功能测试：

• 膜电位：JC-1荧光比值≥2.0、变异系数≤8%
• 呼吸链复合物I活性：单位nmol/min/mg蛋白、抑制率≤5%
• ATP合成速率：单位μmol/min/mg蛋白、线性范围0.1-10.0

基因表达分析：

• NAMPT基因表达：Ct值≤30、foldchange≥1.5
• SIRT3基因表达：Ct值≤30、特异性引物效率≥95%
• NRF2基因表达：Ct值≤30、扩增曲线R²≥0.99

蛋白表达量化：

• SIRT1蛋白水平：检测限≤0.1ng/mL、线性范围0.5-100ng/mL
• PARP1蛋白表达：单位μg/mg蛋白、Westernblot灰度值≥10000
• HIF-1α蛋白水平：检测限≤0.05ng/mL、回收率≥92%

组织学评估：

• 心肌细胞结构完整性：HE染色评分≥4级(参照病理学标准)
• 纤维化程度：Masson染色阳性率≤10%、胶原含量≤5%
• 线粒体密度：电镜图像计数≥50/视野、参照超微结构标准

灌流系统参数：

• 灌流压力：范围70-120mmHg、稳定性±2mmHg
• 流速控制：精度±0.1mL/min、线性范围0.5-10mL/min
• 温度维持：37±0.5°C、波动≤0.1°C

检测范围

1.大鼠离体心脏灌流模型：涵盖Sprague-Dawley或Wistar品系，检测重点为缺血再灌注损伤下的NAD+/NADH比率变化及代谢紊乱评估

2.小鼠原代心肌细胞培养：包括C57BL/6或BALB/c来源，侧重基因编辑(如CRISPR)干预后的氧化还原稳态和细胞活力分析

3.人源心肌细胞系：如AC16或iPSC衍生细胞，检测重点为药物毒性测试中的NAD+浓度和ATP水平波动

4.缺血再灌注损伤模型：模拟心肌梗死条件，检测重点为再灌注阶段NAD+/NADH比率恢复和氧化应激指标监测

5.药物干预样本：包括NAD+前体(如NMN)或抑制剂处理，侧重剂量依赖性代谢参数和酶活性变化

6.基因编辑心肌细胞：如NAMPT或SIRT1敲除/过表达，检测重点为基因-代谢网络调控下的比率值及线粒体功能

7.老年模型心肌细胞：来自老年动物或衰老诱导细胞，检测重点为年龄相关NAD+下降和凋亡指数升高

8.糖尿病模型心肌细胞：高糖或STZ诱导，检测重点为糖代谢紊乱下的NADH积累和ROS水平异常

9.高脂饮食诱导样本：脂毒性心肌细胞，检测重点为脂质过氧化相关的NAD+/NADH比率失衡和SOD活性降低

10.体外循环模拟系统：机械灌流装置，检测重点为流体剪切力对细胞代谢参数和灌流压力稳定性的影响

检测方法

国际标准：

• ISO15193:2022酶法测定生物样本中NAD+和NADH
• ISO17025:2017实验室能力通用要求，涵盖色谱法验证
• ASTME2520-18荧光法量化细胞氧化还原状态

国家标准：

• GB/T5009.124-2023生物样品中NAD+和NADH高效液相色谱法
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价，适用细胞活力测试
• GB/T27404-2008实验室质量控制规范，用于酶活性检测

方法差异说明：ISO酶法侧重比色终点检测，灵敏度±0.05μmol/L，而GB色谱法采用HPLC分离，检测限达0.01μmol/L；ASTM荧光法适用于实时监测，但受自发荧光干扰，GB标准强调样本前处理以减少基质效应

检测设备

1.分光光度计：ThermoNanoDrop2000c型(波长范围190-850nm，分辨率±0.1nm)

2.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII型(流速范围0.001-10mL/min，检测限0.01μmol/L)

3.荧光显微镜：OlympusIX83型(分辨率0.2μm，激发波长300-700nm)

4.微孔板阅读器：BioTekSynergyH1型(检测模式双荧光，精度±1%)

5.实时PCR仪：RocheLightCycler480型(温控精度±0.1°C，通道数6)

6.离心机：Eppendorf5430R型(转速范围100-15000rpm，容量6×50mL)

7.细胞培养箱：ThermoHeracell150i型(温度控制37±0.1°C，CO2范围0-20%)

8.电化学工作站：CHI760E型(电位范围±10V，电流分辨率1pA)

9.质谱仪：WatersXevoTQ-S型(质量精度±0.01Da，扫描速度50Hz)

10.细胞计数器：BeckmanCoulterVi-CELLXR型(计数精度±2%，样本体积0.5-2mL)

11.灌流系统控制器：HarvardApparatus703型(压力控制70-120mmHg，流量精度±0.01mL/min)

12.温度控制单元：JulaboF32型(温度范围-20-150°C，稳定性±0.01°C)

13.酶标仪：PerkinElmerEnVision型(吸光度和荧光双模，通量96孔)

14.超低温冰箱：ThermoRevcoJianCeT2586型(温度-86°C，容量700L)

15.电生理记录系统：AxonAxopatch200B型(带宽10kHz，噪声≤0.1pA)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于心脏灌流心肌细胞NAD+/NADH比率检测相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

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报告作用

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7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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