药用真菌多糖结构表征试验

检测项目

分子量分析：

• 重均分子量(Mw)：范围10-2000kDa(参照GB/T22244-2008)
• 多分散指数(PDI)：≤1.8(参照ISO13885-1:2020)
• 数均分子量(Mn)：精度±5%

• 单糖摩尔比：葡萄糖、甘露糖、半乳糖等(偏差±0.5%，参照GB/T35818-2018)
• 中性糖含量：≥80%(参照ISO22662:2007)
• 糖醛酸含量：≤10%

• α/β构型比例：β-葡聚糖≥60%(参照GB/T35807-2018)
• 连接位点：1→3,1→6键合(参照ISO11292:1995)
• 端基异构体分析：α型≤30%

• 分支频率：每10糖单元0.5-2.0分支(参照GB/T22245-2008)
• 侧链长度：2-10糖单元
• 线性度指数：≥0.7

• 水溶解度：≥95%(25°C，参照ISO5537:2004)
• 有机溶剂耐受性：乙醇中不沉淀
• pH稳定性：pH3-11范围内溶解率≥90%

• 特性粘度：0.5-10dL/g(参照GB/T1632.1-2008)
• 剪切稀化指数：≤0.8(参照ISO3219:1993)
• 零剪切粘度：10-1000mPa·s

• 红外光谱(FTIR)：特征峰1600-1700cm⁻¹(参照GB/T6040-2002)
• 核磁共振(NMR)：¹³CNMR化学位移分析(参照ISO13320:2009)
• 紫外光谱：280nm吸光度≤0.05

• 热分解温度：≥200°C(参照GB/T17391-1998)
• 玻璃化转变温度：50-150°C
• 热重损失率：≤5%(100°C)

• 免疫调节活性：巨噬细胞增殖率≥120%(参照ISO10993-5:2009)
• 抗氧化能力：DPPH清除率≥80%
• 抗肿瘤关联：IC50值≤100μg/mL

• 蛋白质残留：≤0.5%(参照GB/T50095%(参照GB/T5009.5-2016)
• 灰分含量：≤1.0%(参照ISO2171:2007)
• 水分含量：≤8.0%(参照GB/T6435-2014)

检测范围

1.灵芝多糖：从灵芝子实体提取，重点检测β-1,3-葡聚糖含量及免疫增强活性关联

2.香菇多糖：源自香菇菌丝体，侧重分子量分布与抗肿瘤活性验证

3.云芝多糖：提取自云芝发酵液，核心分析糖苷键类型及热稳定性

4.虫草多糖：冬虫夏草来源，着重单糖组成与抗氧化能力评估

5.茯苓多糖：茯苓菌核提取，检测分支度及水溶解度特性

6.银耳多糖：银耳子实体制备，重点粘度测定与生物膜形成关联

7.猴头菇多糖：猴头菇发酵产物，核心评估光谱特征及神经保护活性

8.灰树花多糖：灰树花子实体来源，侧重纯度检测与抗炎效果

9.黑木耳多糖：黑木耳提取物，着重分子量分析及膳食纤维功能

10.金针菇多糖：金针菇菌丝体制备，核心检测糖醛酸含量及消化稳定性

检测方法

国际标准：

• ISO13885-1:2020凝胶渗透色谱法测定分子量
• ISO22662:2007多糖单糖组成的气相色谱分析
• ISO11292:1995核磁共振法鉴定糖苷键
• ISO3219:1993旋转粘度计法测定流变特性
• ISO10993-5:2009体外细胞毒性测试评估生物活性

• GB/T22244-2008GB/T22244-2008高效液相色谱法测定多糖分子量
• GB/T35818-2018离子色谱法分析单糖组成
• GB/T35807-2018红外光谱法表征糖构型
• GB/T1632.1-2008乌氏粘度计法测定特性粘度
• GB/T5009.5-2016凯氏定氮法检测蛋白质残留

检测设备

1.凝胶渗透色谱仪：Waters1515型(分子量范围500-2×10⁶Da，精度±1%)

2.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII(检测限0.01μg/mL，流速0.1-5mL/min)

3.气相色谱-质谱联用仪：ThermoScientificISQ7000(分辨率0.1Da，温度范围50-350°C)

4.核磁共振波谱仪：BrukerAvanceIII600MHz(磁场强度14.1T，频率范围10-700MHz)

5.傅里叶变换红外光谱仪：PerkinElmerSpectrumTwo(波长范围4000-400cm⁻¹，分辨率4cm⁻¹)

6.旋转流变仪：TAInstrumentsDHR-2(剪切速率0.01-1000s⁻¹，扭矩精度±0.1%)

7.差示扫描量热仪：MettlerToledoDSC3+(温度范围-150-700°C，升温速率0.1-100°C/min)

8.

8.热重分析仪：NetzschTG209F3(称量精度0.1μg，温度范围RT-1000°C)

9.紫外-可见分光光度计：ShimadzuUV-2600i(波长范围190-1100nm，带宽1nm)

10.酶标仪：BioTekSynergyH1(检测模式吸光/荧光，波长范围200-999nm)

11.离心机：strong>11.离心机：Eppendorf5430R(转速100-15000rpm，容量6×100mL)

12.冷冻干燥机：ChristAlpha1-4LSCplus(冷阱温度-85°C，真空度0.01mbar)

13.高压灭菌器：Tuttnauer3870E(温度范围50-135°C，压力0-2.5bar)

14.pH计：MettlerToledoSevenExcellence(精度±0.01pH，温度补偿-5-100°C)

15.超纯水系统：MilliporeMilli-QIQ7000(电阻率18.2MΩ·cm，流量2L/min)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】