核酸提取效率分析

关键字:核酸提取效率分析,北检(北京)检测技术研究院,第三方测试机构
所在栏目:材料检测实验室
发布时间:2025-08-19
信息来源:北检院
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检测项目

纯度指标检测:

  • 光学纯度:A260/A280比值(参照ISO21571:2005标准)、A260/A230比值(目标≥2.0)
  • 污染物残留:蛋白质残留量(≤0.5μg/μl)、盐分浓度(电导率≤10μS/cm)
产量指标检测:
  • 浓度测量:DNA浓度(ng/μl±5%)、RNA总产量(μg)
  • 提取效率:回收率(≥90%)、损失率(≤2%)
完整性评估:
  • 电泳分析:凝胶完整性评分(均一主条带)、片段大小分布(200-10000bp)
  • 数值化评分:RIN值(RNA完整性数≥7)、DV200值(≥50%)
污染物检测:
  • 有机残留:酚类残留(吸光度≤0.1)、醇类残留(GC检测限0.01%)
  • 无机离子:镁离子含量(≤1mM)、钙离子残留(ICP-OES检测)
效率性能检测:
  • 时间效率:提取周期(分钟)、自动化周期一致性(变异系数CV≤5%)
  • 成本效率:试剂消耗量(μl/样本)、设备能耗(kWh/运行)
样本适应性检测:
  • 类型特异性:血液样本溶血影响(回收率偏差≤10%)、组织样本匀浆效率(破碎度≥95%)
  • 基质干扰:抑制剂残留检测(PCR抑制率≤5%)、粘度影响(流变参数)
试剂兼容性检测:
  • 试剂盒性能:结合效率(DNA结合量≥95%)、洗涤效率(残留率≤0.1%)
  • 缓冲液优化:pH稳定性(7.0-8.0)、离子强度影响(摩尔浓度0.1-1.0M)
自动化兼容性检测:
  • 平台一致性:批次变异(RSD≤3%)、通量稳定性(96样本/运行)
  • 错误率检测:移液精度偏差(≤0.5%)、处理中断率(≤1%)
环境因素检测:
  • 温度影响:提取效率温度系数(4-25°C变化率≤5%)、冻融稳定性(反复冻融≤3次)
  • 湿度控制:相对湿度影响(40-60%RH范围)、存储稳定性(-80°C保存期≥1年)
应用兼容性检测:
  • 下游适用性:PCR扩增效率(Ct值偏差≤1)、测序成功率(Q30≥80%)
  • 交叉污染:样本间污染率(≤0.01%)、背景噪声(吸光度基线≤0.05)

检测范围

1.全血样本:检测重点包括白细胞裂解效率(裂解率≥98%)和DNA纯度(A260/A280比值1.8-2.0),适用于临床诊断和基因分型分析。

2.组织样本:如肝脏或肿瘤组织,检测RNA完整性(RIN≥7)和污染物残留(蛋白质≤0.5μg/μl),强调匀浆破碎度和抑制剂移除。

3.细胞培养物:检测细胞密度影响(10^4-10^7cells/ml)和提取产量(DNA≥50ng/μl),重点评估培养介质残留和裂解均匀性。

4.环境样本:如土壤或水样,检测抑制物残留(腐殖酸含量≤0.1μg/μl)和提取效率(回收率≥85%),侧重样本预处理和PCR兼容性。

5.法医样本:如唾液或毛发,检测低起始量下回收率(≤5ng输入回收≥70%)和DNA完整性,强调微量样本处理和污染控制。

6.植物样本:如叶片或种子,检测多糖多酚污染(A260/A230比值≥1.8)和核酸纯度,重点评估研磨效率和色素干扰。

7.微生物样本:如细菌或真菌,检测DNA提取纯度(A260/A280比值1.8-2.0)和总产量(≥100ng/μl),强调细胞壁裂解和蛋白酶处理。

8.病毒样本:如RNA病毒颗粒,检测RNA完整性(DV200≥60%)和浓度(≥10copies/μl),侧重病毒裂解和核酸稳定性。

9.固定样本:如FFPE组织,检测DNA片段化程度(片段大小≥100bp)和脱蜡效率,重点评估交联逆转和修复率。

10.唾液样本:检测DNA浓度(≥20ng/μl)和杂质(粘蛋白残留≤0.2μg/μl),强调采集稳定性和缓冲液兼容性。

检测方法

国际标准:

  • ISO21571:2005食品中核酸提取方法(涵盖纯度和产量测试)
  • ASTME2395-18PCR试剂性能评估标准(包括提取效率计算)
  • ISO20186-1:2019分子体外诊断标本预处理(强调样本适应性)
国家标准:
  • GB/T37838-2019核酸提取试剂盒通用技术要求(规定纯度指标参数)
  • GB/T34796-2017核酸浓度测定紫外分光光度法(A260/A280比值检测)
  • YY/T1596-2017人基因检测用核酸样本采集处理(侧重完整性评估)
方法差异说明:国际标准如ISO注重多领域适用性(如食品安全),而国家标准如GB/T更侧重临床应用参数(如回收率);ASTM标准强调试剂性能,GB标准细化设备校准要求。

检测设备

1.紫外分光光度计:NanoDrop2000型(检测范围2-15000ng/μl,精度±1%)

2.凝胶成像系统:GelDocXR+型(分辨率1024x768像素,灵敏度0.1ng)

3.实时PCR仪:QuantStudio5型(温度精度±0.1°C,通量384孔)

4.自动化核酸提取平台:KingFisherFlex型(处理量96样本/运行,回收率≥95%)

5.高速离心机:AllegraX-15R型(转速范围100-15000rpm,温度控制-20-40°C)

6.涡旋混合器:MiniVortexer型(转速0-2500rpm,定时功能0-60min)

7.荧光定量仪:Qubit4.0型(检测限0.05-1000ng,动态范围宽)

8.电泳设备:Owl系统型(电压调节5-300V,凝胶尺寸10x10cm)

9.恒温培养箱:IN260型(温度范围5-80°C,均匀度±0.5°C)

10.微量移液器:Pipetman型(精度±0.5%,量程0.1-1000μl)

11.振荡培养箱:KS130型(频率50-500rpm,振幅可调)

12.纯水制备系统:Integral型(产水电阻率18.2MΩ·cm,流量1L/min)

13.生物安全柜:ClassII型(气流速度0.4-0.6m/s,HEPA过滤)

14.冷藏冷冻箱:MPR-1410型(温度范围-86至4°C,容量500L)

15.核酸片段分析仪:FragmentAnalyzer型(尺寸检测范围35-50000bp,分辨率1bp)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是关于核酸提取效率分析相关介绍,如果您还有其他疑问,可以咨询在线工程师提交您的需求,为您提供一对一解答。

注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外)。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系,科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广,可参考标准多(国标、企标、JianCe、工标、国际标准等)。

5、周期短,费用低,方案全。

6、支持定制化试验方案,数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全,团队强,后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断:包括失效分析、科学诊断、数据验证等,可以快速检测出产品问题,尽快止损;

2、其他鉴定服务:协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析;

4、研发使用:试验经验丰富,试验设备多,为科研工作提供数据支持;

3、高校论文:提供研究性实验数据、分析服务,给论文提供科学依据;

5、投标:检测周期短,准确性高,出具的第三方检测报告合法合规;

7、控制材料质量,进行产品内控,降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通,确定具体的试验方案,我方报价;

2、双方签订委托书,我方接收样品;

3、进行细节沟通,我方进行试验测试;

4、试验测试完成,出具检测测试报告;

5、委托完成,我方提供售后服务。

检测流程

检测仪器(部分)

实验仪器

实验仪器-手机

合作客户(部分)

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