CRISPR脱靶试验

检测项目

基因组编辑效率检测：

• 靶向编辑率：编辑效率≥95%(参照EN ISO 10993-3)
• 插入缺失分析：indel频率(0.1%~5%)、大片段缺失检测
• 编辑深度：覆盖率≥30x(测序深度标准)

脱靶位点识别：

• 全基因组扫描：脱靶位点数(≤5个/基因组)，旁系同源位点分析
• 位点特异性验证：脱靶编辑频率(<0.01%)、突变类型分类(SNV、INDEL)
• 序列相似性评估：同源性阈值(≥85%)，sgRNA错配容忍度

编辑特异性分析：

• 靶向特异性指数：特异性分数≥0.9(计算方法参照标准)
• 非目标效应检测：非编码区突变率(<0.001%)、结构变异分析
• sgRNA设计评估：脱靶潜力评分(≤2级)

细胞毒性评估：

• 细胞存活率：存活率≥90%(MTT法标准)
• 凋亡检测：凋亡细胞比例(<5%)，caspase活性测定
• 增殖能力测试：倍增时间变化(±10%)

分子验证技术：

• PCR扩增效率：扩增效率(90%~110%)，引物特异性验证
• 定量分析：拷贝数变异(CV<5%)，绝对定量标准
• 片段长度分析：片段大小偏差(±5bp)

生物安全性监测：

• 免疫原性检测：细胞因子释放水平(IFN-γ<50pg/mL)
• 基因稳定性测试：编辑后稳定性(≥6个月)，突变累积率
• 致癌风险筛查：肿瘤相关基因突变(阴性)

遗传毒性检测：

• DNA损伤评估：双链断裂频率(<0.1%)，γ-H2AX焦点计数
• 染色体畸变测试：畸变率(<1%)，微核形成分析
• 突变谱分析：突变热点分布(均匀性指数≥0.8)

功能性验证：

• 基因表达分析：目标基因表达变化(fold change 2~10)，mRNA水平检测
• 蛋白功能测试：蛋白表达效率(≥80%)，活性验证
• 通路影响评估：信号通路扰动(Δscore<0.1)

样本质量控制：

• DNA/RNA完整性：RIN值≥7.0(电泳标准)
• 细胞纯度检测：污染细胞比例(<1%)，流式分选标准
• 保存稳定性：冻融循环耐受(≥3次)

大数据分析参数：

• 生物信息学算法：假阳性率(<0.1%)，灵敏度≥99%
• 序列比对效率：比对率≥95%，参考基因组覆盖
• 变异调用精度：召回率≥98%，精确度≥99%

检测范围

1. 人类体细胞：涵盖成纤维细胞、淋巴细胞等，检测重点为治疗应用中脱靶效应风险评估与编辑特异性验证

2. 干细胞模型：包括诱导多能干细胞(iPSC)和胚胎干细胞，侧重多能性维持检测与长期遗传稳定性分析

3. 动物细胞系：如HEK293、CHO细胞，检测重点在工业应用中高通量筛选与毒性阈值确定

4. 植物基因组样本：覆盖水稻、玉米等作物细胞，侧重农艺性状编辑中的脱靶位点定位与环境适应性测试

5. 微生物系统：包括细菌、酵母编辑模型，检测重点为基因簇编辑效率与抗生素抗性评估

6. 类器官模型：如肠道或脑类器官，检测重点在三维结构中编辑渗透性分析与功能恢复验证

7. 胚胎样本：涵盖斑马鱼、小鼠胚胎，检测重点为发育阶段特异性脱靶效应与畸形风险筛查

8. 血液样本：包括全血和分离细胞，检测重点为免疫细胞编辑安全性及临床转化可行性

9. 组织切片样本：如肝脏、脑组织切片，检测重点为原位编辑效率与局部脱靶突变分布

10. 合成生物学构建体：涵盖质粒和病毒载体系统，检测重点为载体整合稳定性与非目标序列影响

检测方法

国际标准：

• ISO 10993-3:2014 基因编辑产品生物学评价-遗传毒性试验
• ISO 20395:2019 生物技术-核酸测序质量要求
• EN ISO 17025:2017 检测实验室通用要求-分子验证部分

国家标准：

• GB/T 30988-2014 分子生物学检测方法通则
• GB/T 35538-2017 基因编辑技术安全评价指南
• GB/T 37871-2019 高通量测序数据分析规范

方法差异说明：国际标准ISO 10993-3侧重体外遗传毒性测试，而GB/T 30988强调样本处理标准化；测序深度要求ISO 20395规定≥30x，GB/T 37871调整为≥25x；编辑效率计算ISO标准使用Z-score法，国家标准采用相对偏差法

检测设备

1. 高通量测序仪： Illumina NovaSeq 6000型(通量1.5TB/run，读长2x150bp)

2. 实时定量PCR仪： Bio-Rad CFX96型(检测通道6个，动态范围10^7)

3. 流式细胞仪： BD FACSAria III型(激光配置488nm/640nm，分选速度70000细胞/秒)

4. 电穿孔系统： BTX ECM 830型(电压范围100-3000V，脉冲宽度1-100ms)

5. 显微成像系统： Olympus FV3000型(分辨率0.12μm，共聚焦模式)

6. 生物分析仪： Agilent 4200型(DNA/RNA完整性检测，灵敏度0.1ng/μL)

7. 离心机： Eppendorf 5424R型(转速范围100-15000rpm，温控±1℃)

8. 恒温培养箱： Memmert INCOmed型(温度范围5-60℃，CO2控制0-20%)

9. 荧光显微镜： Nikon Eclipse Ti2型(物镜放大100x，荧光滤光片组)

10. 核酸提取仪： Qiagen QIAcube型(通量1-96样本，提取效率≥95%)

11. 电泳系统： Bio-Rad PowerPac型(电压10-300V，凝胶大小10x10cm)

12. 酶标仪： Thermo Varioskan LUX型(波长范围200-1000nm，检测模式吸光/荧光)

13. 超低温冰箱： Haier DW-40L338型(温度-86℃，容量338L)

14. 生物安全柜： Esco AC2-4S1型(风速0.3-0.5m/s，HEPA过滤)

15. 计算服务器： Dell PowerEdge R740型(CPU核心64个，内存1TB，存储100TB)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于CRISPR脱靶试验相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

4、检测服务领域广，可参考标准多（国标、企标、通标、工标、国际标准等）。

5、周期短，费用低，方案全。

6、支持定制化试验方案，数据更加科学准确。

7、全国上门取样/现场见证试验。

8、资质全，团队强，后期服务体系完善

报告作用

1、工业问题诊断：包括失效分析、科学诊断、数据验证等，可以快速检测出产品问题，尽快止损；

2、其他鉴定服务：协助相关部门证据链补充、证物材料补充、质量检测、样品分析；

4、研发使用：试验经验丰富，试验设备多，为科研工作提供数据支持；

3、高校论文：提供研究性实验数据、分析服务，给论文提供科学依据；

5、投标：检测周期短，准确性高，出具的第三方检测报告合法合规；

7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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