蛋白质组学样本完整性定量分析

检测项目

蛋白质浓度评估：

• 总蛋白质定量：浓度范围0.1-100mg/mL(参照BCA法标准)
• 特异性蛋白浓度：Albumin≤50μg/mL、IgG≤30μg/mL
• 低丰度蛋白检测：检测限≥0.01ng/μL

降解程度分析：

• 降解指数：0-1scale(≤0.3视为完整)
• 碎片化比率：高分子片段≥70%
• 肽段完整性：N端/C端保留率≥95%

完整性指标计算：

• 完整性得分：1-10scale(≥7视为合格)
• 变性程度：UV260/280ratio1.8-2.0
• 结构稳定性：折叠态蛋白比例≥85%

分子量分布监测：

• 平均分子量：偏差±5kDa
• 高分子量蛋白百分比：>100kDa占比≥60%
• 低分子量组分：<50kDa碎片≤15%

HPLC色谱分析：

• 保留时间一致性：±0.5min
• 峰面积比：主峰/副峰≥5:1
• 洗脱效率：回收率≥90%

电泳评估：

• SDS-PAGE条带清晰度：评分1-5(≥4视为清晰)
• 条带强度比：目标带/背景≥3.0
• 凝胶均匀性：CV≤10%

质谱基峰检测：

• 基峰强度：≥10,000counts
• 信噪比：SNR>50
• 肽段覆盖率：≥70%序列覆盖

样本稳定性测试：

• 冻融循环耐受性：≥5cycles无降解
• 长期储存稳定性：-80°C下≥12个月完整性保留
• 温度敏感性：4-25°C波动偏差≤5%

杂质污染评估：

• 核酸污染：≤0.05ng/μg蛋白
• 盐离子浓度：≤50mM
• 溶剂残留：乙醇≤0.1%

功能性验证：

• 酶活性保留率：初始活性≥90%
• 结合亲和力：KD值≤10nM
• 免疫反应性：ELISA信号强度≥1.0OD

检测范围

1.血清样本：涵盖人血清和动物血清，检测重点为高丰度蛋白如Albumin和IgG的降解程度及浓度稳定性

2.组织裂解液：包括肝脏、肾脏等器官样本，侧重细胞骨架蛋白和膜蛋白的完整性评估及碎片化分析

3.细胞培养上清：针对HEK293、CHO等细胞系，关注分泌蛋白如细胞因子的浓度准确性和降解指数

4.尿液样本：涉及健康与病理样本，检测重点为低分子量蛋白的完整性及杂质污染量化

5.脑脊液：微量样本类型，侧重神经蛋白如Tau蛋白的降解程度和分子量分布监测

6.肿瘤组织：涵盖乳腺癌、肺癌等样本，针对异质性蛋白的完整性评分及功能性保留验证

7.冷冻样本：包括液氮储存样本，检测重点为冻融循环对蛋白质降解指数的影响评估

8.FFPE样本：甲醛固定石蜡包埋组织，侧重固定诱导降解的量化及修复后完整性恢复率

9.外泌体：分离自血清或细胞上清，检测重点为膜蛋白完整性和囊泡稳定性参数

10.植物蛋白提取物：如大豆、小麦样本，关注次生代谢物对蛋白质降解程度的影响分析

检测方法

国际标准：

• ISO10993-18:2020Biomaterialssamplingandpreparation-Proteinintegrityassessment
• ASTME2694-11JianCePracticeforQuantifyingDegradationinBiologicalSamples
• IUPACProteomicsGuidelinesSection5.2-MolecularIntegrityParameters

国家标准：

• GB/T5750.5-2021生活饮用水标准检验方法蛋白质定量分析
• GB/T16886.15-2023医疗器械生物学评价蛋白质降解检测
• GB/T27404-2008实验室质量控制规范蛋白样品处理

方法差异：ISO标准侧重样本前处理均匀性，而GB/T更强调浓度检测精度；ASTM方法适用于降解指数计算，GB/T标准在杂质检测步骤有额外缓冲要求；IUPAC指南涵盖质谱参数，国家标准优先本地化校准

检测设备

1.紫外分光光度计：NanodropOneC(波长范围190-850nm，精度±0.001Abs)

2.SDS-PAGE电泳仪：Mini-PROTEANTetra(电压范围50-300V，凝胶尺寸8x10cm)

3.HPLC系统：1260InfinityII(流速0.001-10mL/min，柱温4-80°C)

4.质谱仪：QExactiveHF-X(分辨率>140,000，质量精度<1ppm)

5.离心机：5425R(转速100-15,000rpm，温控范围-20-40°C)

6.冷冻干燥机：FreeZone(冷凝温度-50°C，真空度<0.001mbar)

7.显微镜：BX53(放大倍数40-1000x，分辨率0.2μm)

8.pH计：SevenExcellence(测量范围0-14，精度±0.01)

9.恒温摇床：Innova42(温度范围4-80°C，转速20-300rpm)

10.生物安全柜：AirstreamClassII(洁净度ISO5，气流速度0.45m/s)

11.凝胶成像系统：G:BOX(像素分辨率20MP，动态范围>3.0OD)

12.微量天平：Cubis(称量范围0.001mg-220g，精度±0.002mg)

13.PCR仪：Veriti(温度梯度0.1-99.9°C，升温速率4°C/s)

14.流式细胞仪：FACSCelesta(激光波长488nm，检测通道14个)

15.真空浓缩仪：EZ-2(蒸发速率1mL/min，温度控制30-80°C)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

3、提供编写MSDS报告、TDS报告服务。

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报告作用

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试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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