肥大细胞脱颗粒阈值测定

检测项目

激活阈值测定：

• 最小刺激浓度：浓度阈值(μM)、EC50计算(参照ISO10993-5)
• 受体结合活性：IgE亲和力(Kd值)、解离常数(s⁻¹)

脱颗粒率分析：

• 酶释放检测：β-己糖胺酶释放率(%)、组胺浓度(ng/mL)
• 颗粒计数：脱颗粒细胞百分比(≥80%触发阈值)

钙离子动力学监测：

• 钙通量变化：峰值浓度(nM)、响应时间(s)
• 离子通道活性：钙离子流入速率(ΔF/s)

细胞活力评估：

• 毒性阈值：细胞存活率(≥95%)、IC50计算
• 凋亡检测：caspase-3活性(RFU)

形态学观察：

• 显微成像：颗粒脱颗粒率(%)、细胞形态分级(1-5级)
• 表面受体表达：CD117阳性率(≥90%)

信号传导分析：

• 磷酸化水平：MAPK磷酸化(OD值)、NF-κB激活(相对单位)
• 基因表达：TNF-αmRNA水平(foldchange)

药效学测试：

• 抑制剂阈值：IC50值(μM)、最大抑制率(%)
• 激动剂响应：EC50(nM)、效能指数

稳定性测试：

• 样品稳定性：储存时间(h)、活性保留率(≥85%)
• 操作重现性：变异系数(CV≤5%)

炎症因子释放：

• 介质定量：组胺释放量(pg/mL)、白三烯浓度(ng/L)
• 细胞因子检测：IL-4水平(pg/mL)、IL-13表达(相对单位)

过敏原响应：

• 特异性激活：过敏原阈值(μg/mL)、交叉反应率(%)
• 脱敏测试：耐受浓度(mM)、恢复时间(min)

检测范围

1.人类肥大细胞系：涵盖LAD2和HMC-1细胞株，重点检测IgE介导激活阈与药物干预响应。

2.小鼠骨髓来源肥大细胞：涉及C57BL/6品系样本，侧重钙离子通量动态及炎症因子释放阈值。

3.大鼠腹腔肥大细胞：针对Sprague-Dawley模型，核心检测脱颗粒率与形态学变化阈值。

4.皮肤组织肥大细胞：包括活检样本，重点评估过敏原特异性激活浓度及局部炎症响应。

5.呼吸道肥大细胞：源自支气管肺泡灌洗液，检测气溶胶刺激下的最小有效浓度与稳定性。

6.肠道肥大细胞：覆盖肠黏膜样本，核心分析食物过敏原阈值及信号传导路径激活。

7.过敏原测试样本：涉及尘螨或花粉提取物，重点量化交叉反应浓度与脱敏效能。

8.药物处理细胞模型：用于抗过敏剂筛选，检测IC50/EC50阈值及细胞活力保留率。

9.临床外周血肥大细胞：针对患者样本，核心评估疾病相关激活阈与炎症介质释放水平。

10.基因编辑肥大细胞：包括CRISPR修饰样本，重点测定受体突变对脱颗粒阈值的影响。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5体外细胞毒性测试(基于MTT法，强调刺激浓度梯度设计)
• OECDTG431体外皮肤刺激评估(使用重组人组织模型，差异：暴露时间优化)

国家标准：

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价(整合β-己糖胺酶检测，差异：缓冲液配方调整)
• GB/T5009.156-2016食品接触材料测试(侧重过敏原响应阈值，差异：样品制备温度控制)

检测设备

1.流式细胞仪：BDFACSCantoII(检测通道14个，分辨率0.1μm)

2.酶标仪：BioTekSynergyH1(波长范围200-999nm，精度±1%)

3.荧光显微镜：OlympusIX83(物镜100x，相机分辨率5MP)

4.离心机：Eppendorf5424R(最大转速15000rpm，温控范围4-40°C)

5.细胞培养箱：ThermoScientificHeracell150i(CO2控制0-20%，湿度≥90%)

6.实时PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio5(热循环速率6°C/s，荧光通道4个)

7.液相色谱仪：Agilent1260InfinityII(流速范围0.001-10mL/min，检测限0.1ng/mL)

8.质谱仪：WatersXevoTQ-S(质量范围5-2000m/z，分辨率30000)

9.显微成像系统：LeicaDMi8(Z轴分辨率0.1μm，活细胞成像功能)

10.恒温振荡器：IKAKS4000i(转速50-500rpm，温度范围室温-60°C)

11.超纯水系统：Milli-QAdvantageA10(电阻率18.2MΩ·cm，产水量2L/h)

12.pH计：MettlerToledoSevenCompact(测量范围0-14，精度±0.01)

13.分析天平：SartoriusCPA225D(量程220g，精度0.01mg)

14.微量移液器：EppendorfResearchPlus(量程0.1-1000μL，误差±0.5%)

15.细胞计数器：CountessIIFL(检测范围1-107细胞/mL，荧光兼容性)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

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试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

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检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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