RNA降解程度检测

检测项目

完整性检测：

• RNA完整性数(RIN)：值范围1-10(参照Agilent2100Bioanalyzer标准)
• 28S/18S比率：理想值≥1.8，降解指示值<1.0
• 电泳图谱分析：片段分布模式(参照标准电泳协议)

纯度检测：

• 吸光度比值A260/A280：1.8-2.0表示蛋白质污染低
• 吸光度比值A260/A230：≥2.0表示无有机溶剂或盐污染
• 荧光检测：荧光强度比值(参照Qubitassay标准)

定量检测：

• 浓度测定：ng/μL(使用分光光度法或荧光法)
• 总量计算：μg(基于浓度和样本体积)
• 线性范围验证：动态范围1-1000ng/μL

降解产物检测：

• 片段大小分析：主要片段长度(bp或nt)
• 降解指数(DI)：计算值基于片段比率
• 副产物检测：降解产物如短片段RNA(参照电泳标准)

酶活性检测：

• RNase活性：活性单位(U/mL，参照荧光底物法)
• 抑制剂存在测试：阳性/阴性结果(参照标准曲线)
• DNase污染检测：活性≤0.01U/μgRNA

稳定性检测：

• 储存稳定性：降解率≤5%/月(-80°C条件下)
• 温度敏感性：降解阈值37°C/1小时
• 冻融循环测试：最大耐受循环≤3次

功能验证检测：

• 逆转录效率：cDNAyield≥80%(参照qPCR标准)
• PCR扩增效率：斜率-3.1to-3.6(参照标准曲线)
• 测序适用性：RIN≥7forNGS

储存条件检测：

• 缓冲液兼容性：pH7.0-8.0稳定性
• 防腐剂效果：降解抑制率≥90%
• 容器材料测试：吸附损失≤5%

提取方法验证：

• 提取效率：回收率≥85%
• 交叉污染：污染率≤0.1%
• 方法一致性：CV≤10%acrossreplicates

对比分析检测：

• 批次间变异：RSD≤15%
• 平台间一致性：R²≥0.95betweenmethods
• 灵敏度测试：检测限1pg/μL

检测范围

1.总RNA：从细胞或组织中提取的RNA样本，检测重点在完整性和纯度，确保无降解用于下游应用。

2.mRNA：富集后的信使RNA样本，重点检测polyA尾巴完整性和降解程度，适用于转录组分析。

3.细胞RNA：直接从培养细胞裂解获取的RNA，检测快速降解和RNase污染，强调实时稳定性。

4.组织RNA：从动物或植物组织提取的RNA，检测交叉链接和固定诱导降解，重点在完整性恢复。

5.血液RNA：从全血或血清分离的RNA，检测溶血影响和球蛋白污染，确保qPCR准确性。

6.植物RNA：从植物材料提取的RNA，检测多糖和多酚干扰，侧重纯度调整和降解预防。

7.细菌RNA：从微生物培养物提取的RNA，检测RNase高活性和快速降解，要求快速处理。

8.病毒RNA：从病毒颗粒或感染样本提取的RNA，检测低拷贝数降解和提取效率，用于诊断应用。

9.合成RNA：人工合成的RNAoligos或transcripts，检测序列完整性和修饰稳定性，适用于对照标准。

10.存档RNA：从福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本提取的RNA，检测严重降解和修复效果，重点在可用的片段大小。

检测方法

国际标准：

• ISO20395:2019生物技术-RNA完整性检测方法(基于电泳和微流体技术)
• ASTME3130-18标准指南forRNAQualityAssessment(涵盖分光光度法和荧光法)
• EN12687:2020分子生物学检测-RNA纯度和定量标准(强调吸光度比值)

国家标准：

• GB/T34797-2017RNA完整性检测规范(使用电泳法，与ISO类似但参数略有不同)
• GB/T34796-2017核酸定量测定方法(基于紫外分光光度法，动态范围调整)
• GB/T37872-2019生物样本RNA提取与检测(整合多种方法，注重实际应用差异)

方法差异说明：国际标准如ISO优先使用微流体芯片进行RIN分析，而国家标准GB/T更常用传统电泳；ASTM指南允许更灵活的荧光检测，而GB/T强调分光光度法的校准曲线；在降解产物分析中，ISO规定片段大小阈值，而GB/T基于本地实验室条件调整。

检测设备

1.生物分析仪：Agilent2100Bioanalyzer(分辨率：1-6000nt，样本通量：12samples/run)

2.分光光度计：NanoDropOne(波长范围：190-850nm，检测限：2ng/μL)

3.电泳系统：Bio-RadExperion(自动分析，片段大小范围：25-6000nt)

4.实时定量PCR仪：AppliedBiosystems7500(检测通道：5-color，灵敏度：1copy/μL)

5.离心机：EppendorfCentrifuge5430(最大转速：15000rpm，容量：24x1.5/2.0mL)

6.自动化提取仪：QiagenQiacube(处理通量：12samples/hour，兼容多种试剂盒)

7.荧光计：Qubit4.0(检测范围：0.1-1000ng，精度：±10%)

8.温控设备：ThermoScientificHeratherm(温度范围：-10°Cto100°C，均匀性：±0.5°C)

9.振荡器：IKAMS3(转速：200-3000rpm，用于混合样本)

10.天平：SartoriusCubis(精度：0.1mg，最大容量：220g)

11.pH计：MettlerToledoSevenEasy(测量范围：0-14，精度：±0.01)

12.冰箱：ThermoScientificForma(温度：-80°C，容积：700L)

13.芯片阅读器：AgilentTapeStation(用于高通量RNA检测，通量：16samples/chip)

14.数据记录仪：GrantSquirrel(记录温度和时间，用于稳定性监测)

15.水浴锅：MemmertWNB(温度控制：20°Cto100°C，精度：±0.1°C)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是关于RNA降解程度检测相关介绍，如果您还有其他疑问，可以咨询在线工程师提交您的需求，为您提供一对一解答。

注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

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7、控制材料质量，进行产品内控，降低成本、风险。

试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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