反义寡核苷酸稳定性分析

检测项目

物理稳定性检测：

• 熔点测定：Tm值(参照USP<785>)
• 溶解度测试：饱和溶解度(mg/mL)
• 外观检查：溶液澄清度、颜色变化

化学稳定性检测：

• 氧化稳定性：过氧化物含量(mmol/g)
• 水解稳定性：脱嘌呤率(%/day)
• 磷酸二酯键稳定性：降解产物比例(%)

纯度分析：

• HPLC纯度：主峰面积百分比(≥95%)
• 杂质含量：已知杂质≤0.5%，未知杂质≤0.1%
• 电泳纯度：条带强度比例

降解产物分析：

• 质谱鉴定：分子量确认，降解片段识别
• HPLC峰面积：降解峰面积占比
• 降解率计算：加速条件下降解速率

生物活性检测：

• IC50测定：半数抑制浓度(nM)
• 结合常数：KD值(nM)
• 细胞抑制率：%抑制at特定浓度

储存稳定性检测：

• 加速稳定性：40°C/75%RH下变化率
• 长期稳定性：25°C/60%RH下有效期
• 条件挑战：不同温度、湿度下的稳定性

热稳定性检测：

• Tm值分析：熔解温度(°C)
• 热变性曲线：dA/dTvs温度

光稳定性检测：

• 紫外照射测试：光照下的降解程度
• 光降解产物：HPLC或质谱分析

酶稳定性检测：

• 核酸酶抗性：酶消化率(%)
• 酶解产物：电泳或MS鉴定

药代动力学参数：

• 半衰期测定：t1/2(小时)
• 清除率：CL(mL/min/kg)

检测范围

1.未修饰反义寡核苷酸：针对磷酸二酯骨架的寡核苷酸，重点检测水解稳定性和酶降解敏感性。

2.硫代磷酸酯修饰寡核苷酸：增强核酸酶抗性，侧重化学稳定性和毒性杂质分析。

3.2'-O-甲基修饰寡核苷酸：改善结合亲和力，检测熔点和生物活性。

4.锁核酸(LNA)修饰寡核苷酸：高亲和力修饰，重点分析热稳定性和特异性。

5.肽核酸(PNA)：非骨架修饰，检测溶解度和细胞穿透性。

6.不同长度寡核苷酸(10-30mer)：长度变异体，评估长度对稳定性的影响。

7.不同序列反义寡核苷酸：GC含量变化，检测序列依赖性降解。

8.制剂形式：冻干粉：固态稳定性，重点水分含量和复溶特性。

9.制剂形式：溶液：液体制剂，检测pH稳定性和防腐剂有效性。

10.临床样品：血浆或组织样本，侧重生物矩阵中的稳定性降解。

检测方法

国际标准：

• USP<785>寡核苷酸测定法
• EP2.2.46核酸类产品检验
• ISO10993-18生物材料降解测试

国家标准：

• ChP2020通则1107核酸类药物检测
• GB/T34797-2017寡核苷酸纯度测定

方法差异说明：USP侧重于药用纯度标准，而EP更强调降解产物限值；ISO提供通用降解测试框架，ChP结合国内监管要求。

检测设备

1.高效液相色谱系统：Agilent1260InfinityII(流速范围0.001-10mL/min，二极管阵列检测器)

2.质谱仪：ThermoFisherQExactiveHF-X(质量精度<1ppm，分辨率240,000)

3.紫外可见分光光度计：ShimadzuUV-2600(波长范围190-1100nm，带宽1nm)

4.荧光光谱仪：HoribaFluorolog-3(激发波长200-900nm，检测灵敏度0.1ng/mL)

5.毛细管电泳系统：BeckmanPA800Plus(电压范围0-30kV，激光诱导荧光检测)

6.实时PCR仪：AppliedBiosystems7500Fast(温度梯度功能，多通道检测)

7.恒温培养箱：MemmertIN260(温度范围-10°Cto100°C，湿度控制)

8.光照稳定性箱：AtlasSuntestXLS+(氙灯光源，irradiance控制)

9.酶标仪：BioTekSynergyH1(波长范围200-999nm，shaking功能)

10.超速离心机：BeckmanCoulterOptimaXPN-100(最大转速100,000rpm，温度控制)

11.冻干机：ChristAlpha2-4LSCplus(搁板温度-55°Cto60°C，真空度<0.1mbar)

12.生物安全柜：ThermoScientific1300SeriesA2(风速0.5m/s，HEPA过滤)

13.热分析仪：TAInstrumentsQ2000(DSC模式，温度范围-180°Cto725°C)

14.核酸提取系统：QiagenQiacube(自动化提取，yield>90%)

15.细胞培养箱：EppendorfCellXpertC170(CO2控制，湿度维持)

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解（高校、研究所等性质的个人除外）。

服务优势

1、拥有完善的检测服务体系，科学、严谨、认证。

2、我院对已出过的报告负责。

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报告作用

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试验流程

1、与工程师沟通，确定具体的试验方案，我方报价；

2、双方签订委托书，我方接收样品；

3、进行细节沟通，我方进行试验测试；

4、试验测试完成，出具检测测试报告；

5、委托完成，我方提供售后服务。

检测仪器(部分)

合作客户(部分)

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